PCR 扩增目的基因
师兄:第一次带师弟做 PCR,准备扩一段目的基因,师弟熟门熟路地从移液器支架上取下了 2.5μL 和 100μL 的 research plus 放到了桌上躺平。那一刻内心强烈 OS:我那宝贵的枪是你能随便躺平的吗?
实验 Tips: 使用移液器前,先准备好所有实验材料,PCR 实验需要低温,因此务必将模板、酶等实验材料在冰上操作; 使用移液枪时选择带滤芯的枪头,防止交叉污染; 如果退火温度尚未确定,试试在 Tm 值附近 5℃ 的范围,温度由高到低进行测试,即可以估算出最佳退火温度。 感受态细胞制备 师姐:有一次,我带师妹做感受态细胞,师妹说她知道感受态细胞,但她一直是购买的商品化的 DH5α 感受态细胞,看来是不知道有些实验室感受态是自己制备的。 实验 Tips: 要密切关注细菌的生长状态,多次转接或者储存于 4℃ 的细菌就不要用啦; 操作在冰上进行且保证环境无菌,记住感受态细胞是很脆弱的,用枪吹打时要温柔的对待它哦; 提前预冷离心机,否则临到使用再打开的话,又要白白浪费宝贵的实验时间了。 细胞培养 师兄 A:实验室细胞房一直很干净,可是上次来新人后,细胞培养箱里面菌落养的比细胞还要好 (╥﹏╥)。 实验 Tips: 细胞房的规范不仅要贴在墙上更要记在心里,规范的管理才有可靠的实验哦; 超净台/生物安全柜内的设备和耗材务必合理分区,避免混乱造成不必要的污染; 需要无菌操作的步骤要尤其注意,酒精千万不能省; 二氧化碳培养箱需要定期清洁和高温消毒,其次向培养箱承液盘里加入的液体一定要保证是无菌的哦!